Las tinciones hematológicas pueden definirse como el conjunto de técnicas o procedimientos necesarios para teñir los elementos celulares de la sangre, para poder ser observados e identificados bajo el microscopio. Para ello es necesario hacer uso de colorantes, los cuales interactúan con los componentes celulares de la sangre y los tiñen según su afinidad química. Existen varias técnicas de coloraciones para células sanguíneas, pero las técnicas basadas en coloraciones tipo Romanowsky son de las utilizadas con mayor frecuencia.
Los colorantes tipo Romanowsky consisten en mezcla de colorantes ácidos (eosina) y básicos (Azul de metileno, azur A, azur B y azur C) y fue utilizada por primera vez por el químico Dmitry Leonidovich Romanowsky para evidenciar el núcleo del parásito del paludismo, para ello, se basó en la idea del Teñido Neutro de Erlich, que consiste en dejar que un colorante básico reaccione con otro ácido para dar lugar a un compuesto de nuevas propiedades. De esta forma, combinada la eosina, colorante ácido, con el azul de metileno, colorante básico derivado de las tiazinas, obtuvo no sólo un aceptable visualización del parásito del paludismo, sino también una amplia gama de colores que, aplicados a las células sanguíneas, constituyen el principio básico para la observación morfológica en el microscopio.
Posteriormente, la técnica de Romanowsky fue perfeccionada por Leishman y Jenner, en Inglaterra y por May-Grünwald y Reuter, en Alemania, quienes consiguieron una mayor estabilidad de los colorantes y una mayor reproducibilidad del método de tinción aplicado a las extensiones de células sanguíneas. Siendo así, como el colorante de Romanowsky pasó a ser la base de colorantes como Wright, Giemsa o Leishman.
En el laboratorio clínico, la tinción de Giemsa es una de las más utilizadas por su facilidad metodológica y por la calidad de sus propiedades diferenciales. La tinción de Giemsa está catalogada como tinción tipo Romanowsky, el cual básicamente es una solución en metanol de un colorante ácido (eosina) y dos colorantes básicos (azur y azul de metileno). Estos colorantes teñirán las estructuras celulares dependiendo de su carácter ácido o básico.
Estas coloraciones permiten distinguir los siguientes aspectos morfológicos y estructuras celulares:
· Forma, dimensiones y contorno de las células sanguíneas.
· Núcleo celular y restos de cromatina, de color púrpura.
· Citoplasma de linfocito, en color azul.
· Citoplasma de monocitos, color grisáceo.
· Granulaciones de los polimorfos nucleares.
· Eritrocitos, de color rosa pálido
· Reticulocitos, color azulado. (Vives, 2006)
A continuación se describe la técnica de tinción con Giemsa:
Material
Frotis sanguíneo seco y rotulado.
Cubeta.
Varillas paralelas.
Frasco lavador con agua destilada.
Pipetas pasteur.
Cronómetro.
Reactivos
Metanol como solución fijadora.
Colorante de Giemsa.
Técnica
Llenar de agua la cubeta para que los colorantes no se peguen al fondo.
Colocar las varillas paralelas sobre los bordes de la cubeta.
Colocar las extensiones sanguíneas sobre las varillas paralelas.
Cubrir las extensiones con metanol y esperar 4-5 minutos.
Decantar para eliminar el metanol.
Cubrir las extensiones con solución extemporánea de Giemsa recién diluída a 1/10 (1 gota de Giemsa por 9 gotas de agua destilada) y dejar actuar durante 25 minutos.
Lavar las extensiones con agua destilada para eliminar los restos de colorante.
Secar las extensiones al aire, colocas en vertical.
Observar los frotis sanguíneos teñidos al microscopio óptico.
Referencias
Reyes, R.(2016) Diagnóstico de filariasis canina, mediante la coloración de romanowsky, en aldeas el zunzo y monterrico del municipio de taxisco, santa rosa. Universidad de San Carlos de Guatemala
Rodríguez, F. (2017) Tinción de Giemsa. Blog de Laboratorio Clínico y Biomédico. https://www.franrzmn.com/tincion-de-giemsa/
Vives, J., y Aguilar, J. (2006). Manual de técnicas de laboratorio en hematología. España: Elsevier